Simple-Fect转染试剂

 

货号：TD-ZR-001

体积：1.5ml（1mg/ml）

储存条件：在2-8°C下储存

有效期：5年

预期用途：仅供科研使用

 

Simple-Fect转染试剂是一种用于将核酸（DNA）转染到真核细胞中的新型阳离子聚合物试剂，具有以下优点：

1. 在不同细胞类型和形式中具有高转染效率。
2. 在含有血清的培养基中，Simple-Fect/DNA复合物可以直接添加到培养基中。
3. 转染后，不需要更换培养基和去除Simple-Fect/DNA复合物。

 

质粒DNA转染粘附细胞

1.1细胞培养

在使用Simple-Fect转染试剂转染的前一天使用不含抗生素的培养基培养细胞，可提高细胞的转染效率达70-90%。

培养体系	需转染的 细胞数量	每个孔或板的 表面积(cm2)	孔板或平皿 的体积(ml)
96孔板	1×104-1.7×104	0.3	0.1-0.2ml
48孔板	2.5×104-5×104	1	0.25-0.5ml
24孔板	0.5×105-1×105	1.9	0.5-1ml
12孔板	0.8×105-2×105	3.8	1-2ml
6孔板	2×105-4×105	9.4	2-4ml
6 cm平皿	4×105-8×105	28	5-10ml
10 cm平皿	1×106-2×106	78.5	10-20ml
14 cm平皿	2×106-5×106	153	20-40ml

 

1.2转染实验流程

以6 cm培养皿为例。如需放大或缩小体系，参见下表（《不同培养体系参考表》）。

1. 将4µg DNA加入500µl DMEM（不含血清）培养基中，吹打混匀。

2. Simple-Fect试剂在使用前需先瞬时离心，使试剂置于管底。将12µl Simple-Fect试剂加入稀释好的DNA中，吹打混匀。

3.  在室温下培养15到20分钟（在此期间每个培养皿更换2ml含血清的培养基）。

4. 将500µl Simple-Fect/DNA复合物加入含有细胞的培养皿中，轻轻前后左右晃动培养皿，使转染混合物与细胞充分接触。

5. 将培养皿放入37°C的CO₂培养箱中培养4小时后再向培养皿中加入3ml含有血清的新鲜培养基。

6. 细胞在37°C的CO₂培养箱中培养24-48小时后即可测试基因表达。

不同培养体系参考表

培养体系	DNA量（ug）	无血清培养基 体积（μl）	Simple-Fect 试剂体积（μl）
96孔板	0.05-0.2	20	0.15-0.6
48孔板	0.1-0.4	50	0.6-1.5
24孔板	0.2-0.5	100	1.5-3.0
12孔板	0.5-1.5	100	3.0-4.5
6孔板	1-3	200	4.5-9
6 cm平皿	4	500	9-12
10 cm平皿	4-8	1000	12-24
14 cm平皿	8-10	2000	24-30

 

 1.3转染结果

 

GFP-293T 24小时	GFP-HCT116 48小时